Różnica między RT-PCR i QPCR

Reakcja łańcuchowa polimerazy odwrotnej (RT-PCR)

RT-PCR vs. QPCR

Postępy w biotechnologii spowodowały odkrycie kilku sposobów radzenia sobie z wymaganiami przeszczepów narządów na przestrzeni lat. Wcześniej osoba, która dobrowolnie przekazałaby dowolny narząd bezpośrednio po śmierci potrzebującemu pacjentowi, mogła tylko rozpocząć operację przeszczepów. Ciągłe badania i badania biologów prowadzą do odkrycia komórek macierzystych.

Komórki macierzyste odnoszą się do tych, które pochodzą z DNA zarodka, które będą służyć jako źródło regeneracji komórek, które w zasadzie byłyby klonem narządu, w którym DNA został pobrany. Podczas gdy działacze na rzecz praw człowieka lobbą w celu zatrzymania takich procedur, udane operacje rzeczywiście udowodniły skuteczność rozwoju komórek macierzystych w przeszczepach narządów.

Zanim jednak można docenić i w pełni zrozumieć komórki macierzyste, należy zapoznać się z różnymi terminologami związanymi z tym odkryciem naukowym. Uprawa komórek macierzystych dotyczy DNA i jego kodowania. Dlatego ważne jest, aby studenci lub osoby zainteresowane dziedziną rozróżniły RT-PCR i QPCR.

Reakcja łańcuchowa polimerazy odwrotnej transkrypcji (RT-PCR) jest jednym z wielu wariantów reakcji łańcuchowej polimerazy lub PCR. Ta technika laboratoryjna jest szeroko stosowana w biologii molekularnej, aby naukowcy mogli wytwarzać wiele kopii konkretnej sekwencji DNA poprzez proces wymyślony jako „amplifikacja.„Różnica między RT-PCR a tradycyjnym PCR polega na tym, że RNA jest najpierw transkrybowane w odwrotnej pozycji do dopełniacza DNA, który wykorzystuje odwrotną transkryptazę. Nowy komplementarne DNA zawierające odwróconą transkrypcję zostanie następnie wzmocnione przy użyciu tradycyjnego PCR lub PCR w czasie rzeczywistym.

Większość studentów studiujących ten proces często popełnia błąd w zamian PCR odwrotnej transkrypcji i PCR w czasie rzeczywistym, ponieważ obaj są skrócone podobnie. Aby uniknąć zamieszania, biolodzy oznaczają PCR w czasie rzeczywistym jako ilościowy PCR w czasie rzeczywistym lub QPCR.

QPCR różni się znacznie od RT-PCR, ponieważ QPCR jest odpowiedzialny za pomiar amplifikacji w miarę występowania. Można powiedzieć, że RT-PCR rozpoczyna proces amplifikacji, podczas gdy QPCR mierzy go w miarę trwania procedury.

Ilościowe PCR w czasie rzeczywistym

QPCR faktycznie zrewolucjonizował tradycyjną metodę podejścia jednokierunkowego, jeśli chodzi o kwantyfikację DNA i RNA, ponieważ stosowanie metody QPCR umożliwia biologom określenie początkowego stężenia kwasu jąderowego, nawet przed zaobserwowaniem wyników reakcji i zapisałem.

Zastosowanie QPCR, które jest obecnie uważane za najsilniejszą i wrażliwą technikę analizy do badań genetycznych, znacznie się poszerzyło. Obecnie bierze udział w ilościowej analizie ekspresji genów, genotypowaniu, wykryciu patogenów i analizie SNP, wraz z pomiarami interferencji RNA.

QPCR jest często łączone z procesem odwrotnej transkrypcji w celu kwantyfikacji posłańca RNA i mikroRNA obecnych w komórkach tkanek obserwowanych i eksperymentowanych z. Daje to następnie inną widoczną różnicę między nimi: RT-PCR może być wykorzystany do procesu amplifikacji, ale należy go połączyć z QPCR do celów kwantyfikacyjnych.

Wiadomo również, że QPCR jest bardziej ilościowy, ponieważ dane mogą być gromadzone w miarę rozwoju fazy wzrostu wykładniczego (log) PCR. Biolodzy zauważają, że ilość produktu ubocznego PCR jest wprost proporcjonalna do ilości szablonu kwasu nukleinowego, który będzie mierzony za pomocą QPCR.

Z drugiej strony, RT-PCR jest dalekie od posiadania charakteru ilościowego jako przestrzegania intensywności wzmocnionego pasma na żelu po ustalonym standardie stężenia może prowadzić do wnioskowania „półilościowego”.

Streszczenie:

1.QPCR i RT-PCR są oba terminy stosowane w biotechnologii i wykorzystywane do produkcji wielu kopii DNA.
2.RT-PCR służy do wzmocnienia odwróconej transkrypcji kodu DNA; QPCR mierzy wzmocnienie.
3.RT-PCR służy do amplifikacji, podczas gdy QPCR jest do kwantyfikacji.
4.QPCR ma charakter ilościowy, podczas gdy RT-PCR nie jest.